【试验目标】
（1）学会精确利用微生物试验中常用的接种对象，把握各类接种技巧。
（2）窥察细菌的培育特点，学会断定细菌正在分歧培养基上的发展情况。
【试验原理】
1．无菌接种技巧
无菌接种技巧是微生物研讨中最根本的操纵技巧之一。所谓接种即把微生物杂菌种正在无菌前提下移植到适宜的培养基上，经培育取得杂培育物。是以，接种普通要求正在无菌室、超净工作台（图2-1）或实验室火焰旁严厉按无菌操纵停止。依据试验目标的分歧，采取的接种方式也分歧，普通可分为斜面接种、平板接种、液体接种、穿刺接种等。斜面接种：是从已发展好微生物的斜面上挑取少许菌种移植至另一新颖空缺斜面培养基上的接种方式。它是菌种培育的最常用方式之一。平板接种：是用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管将必然体积的菌液移至平板培养基上，然后停止培育。它次要用于菌落形态窥察、离散纯化菌种、活菌计数或其他实验。
穿刺接种：是次要用于接种厌氧菌、搜检细菌的运动才能或收藏菌种的一种接种方式。接种时，将沾取菌种的接种针从半固体培养基概况向下穿刺，正在濒临管底处，接种针再循原路抽出。液体接种：是将斜面菌种或液体菌种接种到液体培养基中的一种方式。它用于菌种的液体培育或液体培养基中发展特点的窥察。
2．细菌培育特点窥察
培育特点是指微生物正在培养基上所显示的群体形态跟发展环境。正在必然的培育前提下，分歧的微生物培育特点各不相同，这是判别各类微生物的根据之一。细菌培育特点普通用固体、半固体跟液体培养基停止培育窥察，此中固体培养基又分平板跟斜面两种情势。斜面培养基上的菌苔特点：自下而上正在斜面培养基上同等直线接种，经培育，分歧的细菌可以显现丝状、刺毛状、念珠状、蓬松状、树枝状或假根状等分歧的菌苔特点。平板培养基上的菌落特点：把细菌培育正在平板上，次要窥察菌落的形态、隆起及边缘等情况，例如菌落的巨细，概况干湿水平，隆起、扁平或凸起，粗拙或润滑，边缘整洁或没有整洁，菌落通明、半透明或没有通明，颜色和质地等，如图2-2所示。
液体培养基中的发展特点：细菌正在液体培养基中有三种发展景象。大多数细菌正在液体培养基中发展繁衍后呈平均浑浊；少数链状摆列的细菌（如链球菌、炭疽芽孢杆菌）等则呈积淀发展；枯草芽孢杆菌、结核分枝杆菌跟铜绿假单胞菌等专性需氧菌普通呈概况发展，常造成菌膜。半固体培养基中的发展特点：半固体培养基次要用于细菌动力学实验。有鞭毛的细菌除沿穿刺线发展中，正在穿刺线两侧也可见羽毛状或云雾状浑浊发展。无鞭毛的细菌只能沿穿刺线呈较着的线状发展，穿刺线两边的培养基依然廓清通明。
【试验东西】
代孕一次放几个受精卵1．菌种大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Stap hyloccocus aureus）、蕈状芽孢杆菌（Bacillus mycoides）、粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）等。
2．培养基牛肉膏卵白胨火培养基（斜面、液体、半固体）。
3．仪器跟器具接种环、接种针、涂棒等接种对象（图2-3）。试管、移液管、滴管、培养皿、培养箱、酒精灯等。
【试验步调】
1．斜面接种
1）贴标签：接种前正在距试管心2～3cm地位上贴上标签，说明菌名、接种日期等。
2）扑灭酒精灯。
代孕套餐方案3）手持试管：将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。
4）接种环灭菌（图2-4）：用火焰将接种环烧白，然后将接种环往返经由过程火焰数次。
5）拔管塞：用小指、无名指跟手掌拔下试管塞，并夹于手中。试管心徐徐偏激灭菌，切勿烧得过烫。
6）与菌种：将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环打仗一下不长菌的培养基部门，使其冷却，再轻轻沾取少许菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管。留神：不要使接种环的部门碰着管壁，掏出后不成使接种环经由过程火焰。
7）接种：正在火焰旁疾速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接种斜面试管。从斜面培养基的底部向上部做“之”字形麋集划线。留神：切勿划破培养基。也可用接种针在斜面培养基的中心划一条直线接种，可窥察分歧菌种的发展特色。
8）塞管塞：掏出接种环，灼烧试管心，并正在火焰旁将管塞旋上。留神：塞棉塞时，不要挪动试管，以避免试管正在挪动时归入不洁氛围。以上所述的无菌操作过程见图2-5。
9）灼烧接种环：将接种环灼烧灭菌后放回原处。
10）培育：将接种好的试管于37℃培养箱中培育，24h后窥察发展环境。
3．液体接种
（1）斜面菌种接种液体培养基
1）接种前的操纵：同上。
2）接种：用接种环取少许斜面菌种移入培养基容器（试管或三角烧瓶等）中，将接种环在液体概况振荡或与容器壁轻轻摩擦，使菌苔散开。掏出接种环，塞好棉塞，再轻轻动摇液体，使菌体均匀分布正在液体中。
3）培育：将接种好的试管竖立于37℃培养箱中培育，24h后窥察发展环境。
（2）液体培育物接种液体培养基
1）接种前的操纵：同上。
2）接种：与无菌移液管（或移液器），伸入菌种管内汲取适量菌液，转接到待接种的液体培养基内。塞好棉塞，再轻轻动摇液体，使菌体均匀分布。
3）培育：将接种好的试管竖立于37℃培养箱中培育，24h后窥察发展环境。
4．穿刺接种
1）手持试管：按斜面接种法握持菌种管和半固体培养基管，接近火焰。
2）与菌种：将接种针在火焰上炙烤灭菌，冷却后从菌种管中挑取少量待接菌菌苔，疾速移至半固体培养基管中。
3）穿刺接种（图2-6）：将接种针从培养基中心垂直刺入管部3/4深处，然后沿原路抽回。留神：接种针不克不及正在培养基中摆布挪动，只能有一条穿刺线。
4）塞管塞：试管口经火焰灭菌后，塞上棉塞。灼烧接种针。
5）培育：将接种好的试管置于37℃培养箱中培育，24h后窥察发展环境。
5．平板接种
（1）划线法
1）倒平板（图2-7）：将熔化的琼脂培养基冷却至45℃摆布，正在酒精灯火焰旁，用右手的无名指及小指夹持棉塞，左手翻开无菌培养皿盖的一边，右手持三角烧瓶向培养皿里注入20mL摆布的培养基。将培养皿略加扭转动摇后，置于程度地位待凝。
2）划线：正在酒精灯火焰上灼烧接种环，待其冷却后，以无菌操纵与少许菌苔或菌液，伸入皿内，正在平板上的一个区域沿“之”字形往返划线（具体方法参见试验9）。划线时，使接种环在琼脂概况作轻快滑动，切勿划破概况。
3）培育：划线终了后，灼烧接种环，在皿底用记号笔说明菌种称号、日期、姓名（或学号），将培养皿颠倒放入37℃恒温培养箱中培育。
（2）三点接种法普通用于霉菌菌落窥察的接种方式。
1）倒平板：同上。
2）三点接种：无菌操纵下，用接种针从斜面与少许胞子，针尖垂直地址接正在平板培养基概况上，点接三次，接种成果见图2-8。留神：三点呈等边三角状，三点均位于培养皿的半径之中间。
3）培育：将平板连结颠倒形态放入培育箱内（切忌往返翻动），适温培育1周。
（3）涂布法
1）倒平板：同上。
2）与菌液：用1mL无菌吸管汲取经得当浓缩的菌液0.2mL于平板中。
3）涂布：用无菌涂棒正在平板概况平均涂布（图2-9）。
4）培育：室温下静置5～10min后，倒置于37℃恒温箱中培育24～48h。
【实验报告】
1．试验成果窥察并纪录用分歧接种方式培育失掉的细菌菌落形态特点，并列表比力几种细菌的菌落特点。
2．思考题
（1）用斜面接种窥察微生物的培育特点时，为何不要划多条线或蛇形线，而只划一条直线？
（2）好氧的、具周生鞭毛的菌株正在半固体穿刺跟液体培养基中的培育特点离别是怎样的？（张萍华）
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