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供卵试管的姐妹有没有_猴头菇母种分离和接种的方法

时间:2023-01-26 04:41 来源:后藤供卵医疗机构 点击:416次

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导语:猴头菇母种生产的常用材料主要有:马铃薯、葡萄糖、琼脂和水,接下来一起看一下母种分离的方法和接种的方法。

一:母种分离方法

母种分离方法较多,在猴头菇生产上主要用组织分离法、孢子分离法和基质分离法。

1.组织分离法

子实体是特殊分化的菌丝体,从其任何一部分组织中分割下一小块均可重新长出菌丝体,并进一步发展形成新的子实体。组织分离法长出的菌丝体能够很好地保持亲本的生物学特性,不易发生遗传变异,无论幼菇还是成熟菇体,只要是新鲜的,均能分离培养。这种方法简单易行,便于推广应用,是菌种生产经常采用的方法。

(1):种菇选择

选择发育良好的子实体是获得合格菌种的先决条件。种菇要求选择出菇早的头潮菇,生长旺盛、符合本品种特征、菇形正常、大小适中、颜色洁白、菌刺丰满、无病虫为害的子实体。

(2):分离方法

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将选择好的种菇切去基部,冲洗干净,于无菌室(接种箱、超净工作台等)内用无菌水冲洗数次,并用无菌纸充分吸干表面水分,再用0.1%升汞浸泡5分钟。取出后用无菌水冲洗多次,或直接用75%的酒精涂擦菇体表面,进行表面消毒。消毒后,在酒精灯火焰上方,用清洁的小刀削去菌刺,然后用双手将其掰开,迅速用接种针挑取中间约绿豆大的一块菌肉,放入试管斜面培养基上。

(3):培养

把带有组织小块的试管放入25℃的恒温箱中培养,2~3天后组织块及其周围便可长出白色菌丝、7~8天后菌丝长满斜面。新分离出来的菌株,还需要经过3~4次转管纯化,选择长势较好的进行出菇试验。

2.孢子分离法

孢子分离法又称为孢子弹射法,它是在无菌条件下,利用子实体自行弹射孢子的特性,使孢子散落在人工培养基上,经过培养得到原始菌丝体的方法。这种方法由于需要较多的设备,做法也比组织分离法复杂,因而未被广泛使用。孢子分离法的操作方法如下:

(1):种菇选择

选择应从菌丝开始,要选菌丝生长粗壮、无病虫杂菌、出菇均匀、发育正常且正在弹射孢子的子实体。最好从纽扣大小就开始标记,观察长势,经过比较,选择最优者作为种菇、达八九成熟时采收。

(2):分离方法

分离时,采下种菇,削去基部,在无菌室或已消毒的接种箱中,首先对种菇用75%的酒精进行表面消毒,然后在酒精灯火焰上方切取一小块带有1~3根菌刺的子实体,迅速贴附于斜面培养基中部正上方的试管内壁上,塞上棉花,将试管竖放在广口瓶中,使孢子自由弹射到培养基上。经过4~6小时,当培养基表面出现孢子印痕时,在酒精火焰上方将子实体块取出。

(3):培养取出子实体块后,将试管放人25℃左右的恒温培养箱中培养,3~4天后即可见孢子上长出白色菌丝。此时即可从孢子萌发比较稀疏的部位,用接种针取菌落边缘的菌丝尖端进行移接。经几次转管后,从中选出长势良好的进行出菇试验。孢子分离法所得的菌株只有通过出菇试验证明其高产、稳产、生物性状优良后,才能用于生产。

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3.基质分离法

基质分离法也称为菇木分离法、寄主分离法。

(1):菇木选择

在盛产猴头菇的季节,到深山老林中寻找野生的猴头菇。选择出菇多、菇体大、生长健壮、无病虫害、出菇1~2年的菇木。

(2):分离方法

把选择的菇木晾干,在子实体生长部位锯取约2厘米长的小段,放在0.1%氯化汞溶液或75%的酒精中浸泡1分钟,取出后用无菌水冲洗多次,用无菌纱布将菇木揩干,放在无菌纱布上,用无菌刀把木块四周切去,再将木块切成半根火柴棍大小,截去两头,移接斜面培养基中。

(3):接种培养

把接有种木的试管放人25℃的恒温培养箱中培养,2~3天后种木及其周围可长出白色菌丝,说明分离成功。新分离出来的菌株,还需要经过3~4次转管纯化,选择长势较好的进行出菇试验。

二:母种接种方法

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接种是母种生产的一个中心环节,接种技术是母种生产的一个核心技术。接种的每一环节都要求无菌操作,不仅要创造一个无菌的空间,人手及任何一个用具也都要求消毒,而且操作动作要迅速、敏捷。母种的接种通常是在接种箱中或超净工作台上进行。

(1):将所有用品包括空白斜面培养基、接种钩、接种铲、酒精灯、火柴等接种工具放人接种箱内,按消毒操作规程对接种箱进行消毒。消毒后打开工作灯,用75%的酒精棉球擦洗双手,伸人接种箱内,再擦接种工具。

(2):接种工作全部在点燃的酒精灯旁进行,接种时左手用大拇指和其他四指将菌种管和待接种的试管握住,使中指位于两试管之间的部分,右手握接种钩。斜面向上,并使两支试管处于水平状态。同时应该先将棉塞用右手拧转松动,以利于接种时拔出。

(3):将接种钩放在酒精灯的外焰上面灼烧后,靠在试管内壁冷却。凡是在接种时可能进人试管的部分,都应用火焰灼烧。

(4):将左手握的试管移至酒精灯一侧,用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞。先在火焰上将试管口微烤一下,并转动试管,将试管口沾染的少量杂菌烧死。

(5):使接种钩接触没有长菌的培养基部分,使其冷却,以免烫死菌体。然后轻轻接触菌种挑取黄豆粒大小的菌丝体,将接种钩抽出试管,注意不要使其碰到管壁。迅速转入到新试管中央,将试管口在火焰上稍灼烧,将棉塞燎烧至做焦并塞回到接种完的试管口上。右手将接种钩放人菌种管内,保持火焰封口状态,并用左手将接好种的试管放下,重新取一支斜面培养基试管,重复上面操作,直至试管接种完。

整个过程应迅速、准确,一般一支试管母种可转接30支新试管,因此操作比较熟练的工作人员往往不将原菌种管的棉塞塞回,以便于转接工作的进行。这样操作时必须保证该试管口一刻也不离开火焰,否则极有可能带来杂菌污染。

个人建议:操作者在取、换试管时应注意只能接触试管底端,而不要接触试管口以免被烫伤。

以上是猴头菇的分离和接种的方法。了解更多关于猴头菇的知识,欢迎关注!

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参考资料